仪器设备展播
蛋白纯化仪
发表时间:2013-11-13 阅读次数:1733次
   

1.仪器描述

  仪器摆放位置:生物药学楼6#-205

  固定资产编号:201343995

  厂商、型号: 通用电气集团 AKTApurifierTM 100

  性能参数:

AKTApurifier 100

重现性

+-0.01 nm

流速范围

0.01-100 ml/min

线性

<2%(在260 nm,样品尿嘧啶,pH=2,紫外吸收上升到2 AU时)

压力范围

0-10 MPa

噪音

<6×10-5 AU(230 nm)

电导范围

1 µS/cm - 999.9 mS/cm

漂移

<2×10-4 AU/h (254 nm)

pH范围

2-12

最大压力

2 MPa (20 bar, 290 psi)

温度范围

4℃-40℃

pH/C-900 pH/电导检测器

体积

500 mm×460 mm×620 mm

电导单元

 

重量

75 kg

电导范围

1 µS/cm-999.9 mS/cm

P-901泵

噪音

+- 0.5%(满刻度校准范围内)

流速范围

0.01-100 ml/min

pH单元

 

增量

0.01 ml/min

pH范围

0-14(有效使用范围2-12)

压力范围

0-10 MPa (100 bar, 1450 psi)

精度

+- 0.1 pH单位,温度补偿

体积

< 1800 µl/pump module

稳定性

最大偏移0.1 pH单位/10小时

粘性

最大5 cP

收集器  FRACTION COLLECTOR FRAC-950

UV-900紫外光/可见光检测器

pH范围

1-13

波长范围

190-700 nm

时间模式

0.1-99999.99 min

检测波长

同时检测3个波长

容量

120管(18 mm),8管(30 mm)

波长可调范围

1 nm

流速

0.001-100 ml/min

带宽

4 nm

操作温度

4℃-40℃

波长精度

+-2 nm

深度

550 mm

 

 

相对湿度

20%-95%(不能冷凝)

         
 

  负责人及联系方式:李宁环 34208024

 

2.开机

  打开主机和电脑电源,待仪器自检完毕(CU950 上面的 3 个指示灯完全点亮不闪烁),双击桌面上     UNICORN 图标,进入操作界面。

 

3.准备流动相和样品

  所有的工作溶液和样品必须经过 0.45µm 的滤膜过滤,样品也可高速离心后取上清备用。当缓冲液中   含有有机溶剂(如乙腈、甲醇),需在使用前用低频超声脱气 10min。

 

4.清洗管道及装柱

  4.1 首先将 A1 管道放入平衡液或 banding buffering 中,将 B1 管道放入高盐溶液中或 elution     buffering 中,在 system control 窗口点击 manual→pump→pump wash basic,选中 A1,B1 管道为   ON, execute。泵清洗程序会自动运行结束。

  4.2选择manual→pump→flow rate,输入流速 1ml/ml,insert;选择 manual→Alarm&mon→alarm     pressure,设置 high alarm(输入填料的耐受压力,可在填料说明书中查到),insert,execute。   将进样阀的 1 号位管道接入柱子的柱头,稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉,直接拧入紫外流动池或连   接管道。

 

5.手动运行

  5.1平衡  

  柱子平衡好了(观察电导 COND,pH ,UV的数值正确曲线走稳了)。此时将紫外调零,选择  manual→Alarm&mon→autozero,exectue,就准备上样了。

  5.2上样 

  5.2.1 用样品环上,将样品吸进注射器,推掉气泡,从进样阀的 3 号位推入(进样量不得低于样品环   的体积的2倍),不要取下注射器。选择 manual→flowpath→injectionValve→inject,execute。

  5.2.2 用样品泵上样(AKTAexplorer 系统),将样品置于 Sample Valve 1 号位(可以选 8 个不同   的位置),点击 manual→pump→Direct Load_960 输入进样流速和体积,execute。注意样品的管路   要事先充满缓冲液。

  5.2.3 用系统泵上样:点击 pause,将 A1 放入样品中,点击 continue;待样品上完后,再将 A1放   入到平衡液中继续清洗柱子。 

  5.3 洗脱 

  用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。选择 manual→pump→gradient,按照自己的条件选择 target      %B(例如 100%)和 length(例如 20min),execute。

  5.4 收集  

  5.4.1 固定体积收集:

  选择 manual→Frac→fractionation_900,输入每管收集体积,exectue。结束固定体积收集选择      Frac→fractionation_stop_900,exectue。

  5.4.2 峰收集:

  选择 manual→Frac→Peak_FracParametersUV,输入峰收集参数,insert,点击    Peak_Fractionation_900,输入每管最大收集体积,insert,exectue。结束峰收集,选择  Peak_FracStop_900,execute。

 

6.编程及自动运行

  6.1 点击 mothed editor 窗口里工具栏的 mothed wizard 快捷图标,打开对话框。

  6.2 按照对话框的要求选择条件,编好后按 finish 出现编程结果,在变量框中可以更改变量。保存   点击工具栏里的保存快捷图标,输入文件名,点击 ok。

  6.3 运行自动程序:在 system control 窗口点击工具栏中的 RUN 打开编好的方法,点击 next 直到   start 开始运行。

  6.4 运行中,按下工具栏上的 hold 键表示保持目前的运行模块状态不进入到下一个命令中。点击    manual→other→next breakpoint 表示进入到下一个模块指令。

  6.5 运行结束后,结果自动保存。

 

7.清洗系统及拆柱

  将 A1 和 B1 入口放入纯水中,启动 pump wash purifier 功能冲洗 A 泵和 B 泵及整个管路。然后   再将 A1 和 B1 入口放入 20%乙醇中,同样操作将乙醇冲满整个管路保存。系统给柱子一个慢流速,   设置系统保护压力,然后先拆柱子的下端,拧上堵头,再拆柱子的上端,拧上堵头。

 

8.关机

  从软件控制系统的第一个窗口 unicorn manager 点击退出,其他窗口不能单独关闭。然后关闭AKTA     主机电源,关闭电脑电源。

 

9.注意事项

  9.1 所有的工作溶液和样品必须经过 0.22 µm的滤膜过滤。当缓冲液中含有有机溶剂(如乙腈、甲    醇),需在使用前用低频超声脱气 10min。缓冲液和样品过滤并超声处理时间超过12 h需重新进行过滤  和超声处理。

  9.2 样品尽量不要带有颜色,尤其是深颜色样品,有颜色样品应进行脱色处理。绝对禁止使用带颜色   的样品直接上凝胶柱。

  9.3 使用时务必要设置报警压,该压力最好低于预装柱(填料)的上限压力。

  9.4 预滤器中的滤膜应定期更换。

      9.5 使用者应随时注意操作过程中的压力及其他参数变化,若发现参数不稳定应及时向负责人反应。

 

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