仪器设备展播
高效液相色谱仪
发表时间:2013-12-09 阅读次数:1588次
1.仪器描述
仪器摆放位置:6#-205
固定资产编号:201348926
厂商型号:Agilent 1260
性能参数:

泵的原理

低压四元混合,集成高性能脱气元件

泵的延迟体积

600μl~800μl

流速范围

0.05—5ml/min(600bar),5—10ml/min(200bar)

最大压力

600 bar

上样量

0.1~100μl

柱子规格

长度:最长300mm;ID:0.05~8mm

柱温箱温度范围

-5℃ ~ 80℃

自动进样器连续进样次数

1~99次

检测器波长范围

190 ~ 640nm

检测器狭缝宽度

4nm

负责人及联系方式:张蕾 34208024
耗材及存放位置:安捷伦液相小瓶;C18柱子。存放于药学院6#-205实验室。
2.开机前准备
   2.1配置流动相
      根据实验要求配制流动相,须经0.45μm滤膜过滤,之后再进行脱气处理,使用前必须用超声波振荡l0-15min,按无机相和有机相分开别装入溶剂瓶A(装有洗盐装置,最好固定盛放无机盐水相)、B中。
   2.2样品预处理
      对照品和样品溶液进样前要经0.45μm滤膜过滤。
 
3.开机
   3.1打开计算机,进入 Windows 系统
   3.2打开Agilent 1260 HPLC各模块电源开关(从上至下),待各模块自检通过并与计算机通讯成功(约1~2min)后,双击桌面上的“仪器1联机”图标,将自动进入online工作站。
 
4.系统初始化(主要目的即为排气泡)
   4.1把各流动相放入容积瓶中。
   4.2打开Purge阀(逆时针),右击“泵”图标出现参数设定菜单,单击“设定泵”选项进入泵编辑画面。
   4.3设“流量”逐步增大流速至5ml/min ,A通道设到100%,单击“确定”。 
   4.4单击“泵”图标,出现参数设定菜单,单击“泵控制“选项选中“开”单击“确定”则系统开始Purge,直到管路内由溶剂瓶A到泵入口无气泡为止;依次切换B、C、D通道(通道设到100%),继续Purge直到所有通道管路内均无气泡为止。
   4.5关闭Purge阀(顺时针),完成系统初始化。
 
5.平衡
   5.1将泵的流量设到0.5ml/min,若使用双泵则应设定溶剂配比,如A=80%,B=20%;再将流量设到0.8ml/min,2分钟后设定至方法所需流速,冲洗色谱柱20-30min。
   5.2单击泵下面的瓶图标,输入溶剂瓶A、B内流动相的实际体积(为保护泵和色谱柱,请按实际体积输入)和停泵的体积单击“确定”,如果各溶剂瓶溶剂体积小于停泵体积,泵将自动停止。 
   5.3把缓冲液(用于柱子过渡的,与流动相等比例的乙腈/水、甲醇/水或10%的水溶液)换成流动相,排气后,逐步增加至所需流速,待柱压基本稳定后,打开检测器等,在“Online Plot”窗口中观察基线情况,至基线稳定后,点击“Balance”键进行基线调零。
 
6.编辑方法
   6.1 编辑完整方法:从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项,选中除“数据分析”外的三项,单击“确定”进入下一画面。
   6.2 方法信息:在“方法注释”栏中输入方法的描述信息(如方法的用途等),单击“确定”进入下一画面。
   6.3 泵参数设定:在“流速”处输入方法所需流量(如1ml/min);默认为A为100%,如需二元高压,在“溶剂B”处输入所需比例,则溶剂A=100-B ,也可“插入”一行“时间表”编辑二元梯度;在“压力限”处输入柱子的最大耐高压(建议设定200bar)以保护柱子 ,单击“确定”进入下一画面 。
   6.4 柱温箱参数设定:在“温度”左侧下面的方框内输入所需温度,并选中它,右侧选中“与左侧相同”——使柱温箱的温度左右一致。
   6.5 DAD检测器参数设定:在“波长”下方的空白处 输入所需的检测波长,如254nm,可同时输入多个不同波长;在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间(如>0.1min (2s));如有特殊要求,也可在“时间表”中可以“插入”一行输入随时间切换的波长(如1min 波长=300nm),点击“确定”。
   6.6在“运行时选项表”中选中“数据采集”选项,单击“确定”。
   6.7单击“方法”菜单选中“方法另存为”输入方法名,单击“确定”。
   6.8 从“视图”菜单中选中“在线信号”,选中“信号窗口1”,然后单击“改变”钮,将所要查看的信号移到右边框中,单击“确定”。
   6.9 进样器参数设定:在进样模式中输入“进样量”xxμl,默认为20μl。“标准进针”只能输入进样体积,此方式无洗针功能。“针清洗后进样”可以输入进样体积和洗瓶位置为xx,此方式针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针。
 
7.运行样品
   7.1单针进样
      7.1.1选择“单针进样”图标。
      7.1.2从“运行控制”菜单中选择“样品信息”选项,在弹出的窗口中填写样品信息。 注意“样品位置”填写进样瓶的位置,并将样品放入对应的位置。
      7.1.3点击画面中的“开始”运行方法,中间停止采样点“结束”。
   7.2 序列进样
      7.2.1“序列”下“序列参数”,设置同单针进样,样品位置不填。
      7.2.2“序列”下选择“序列表”,在表格中可进行“插入”、“剪切”“复制”“粘贴”“追加行”等操作,表格中必须填写“样品瓶”“样品名称”“方法名称”“进样次数”“数据文件”“进样量”等信息,其他信息可选择编辑。编辑完成后,单击“确定”。在“序列菜单中选择“序列模板另存为”为新建序列命名。注意“样品位置”填写进样瓶的位置,并将样品放入对应的位置。
      7.2.3在“仪器”菜单中选择“运行序列”运行当前序列。停止采集数据选择“仪器”菜单中“停止运行/进样/序列”。或者同单针进样的方法。
 
8.数据处理 
   8.1 从“视图”菜单中单击“数据分析”进入数据分析画面。
   8.2从“文件”菜单选择“调用信号”选中所做的数据文件,单击“确定”,也可直接双击打开。
   8.3做谱图优化:从“图形”菜单中选择“信号选项”,再从“范围”中选择“自动量程”及合适的显示时间单击“确定”或选择“自定义量程”调整,反复进行直到图的比例合适为止。
   8.4积分优化 
      8.4.1从“积分”中选择“自动积分”, 若积分结果不理想,再从菜单中选“积分事件”选项,选择合适的“斜率灵敏度”、“峰宽”、“最小峰面积”、“最小峰高”。
      8.4.2从“积分”菜单中选择“积分”选项,则数据被积分。
      8.4.3如积分结果还不理想,则修改相应的积分参数直到满意为止。 
      8.4.4单击左边“保存并退出”图标将积分参数存入当前方法中。 
   8.5打印报告
      8.5.1从“报告”菜单中选择“设定报告”选项。
      8.5.2单击“定量结果”框中“定量”右侧的黑三角选中所采用的报告方法(如面积外标法等),单击“确定”。 
      8.5.3从“报告”菜单中选择“打印”则报告打印结果将显示在屏幕上,如想输出到打印机,则单击“报告”底部的“打印”钮即可。
 
9.关机
   9.1关机前,用95%水冲洗柱子和系统0.5-1小时,流量0.5-l.0ml/min,再用100%有机溶剂冲0.5小时,然后关闭系统。
   9.2退出化学工作站,及其它窗口,关闭计算机(用shutdown关)。
   9.3关掉Agilent 1260 HPLC各模块电源开关。
 
10.注意事项
   10.1氘灯是易耗品,应最后开灯,不分析样品即关灯。
   10.2 流动相不要使用多日存放的蒸馏水(易长菌)。
   10.3 为了保护系统及色谱柱,每做完一次实验务必将系统内的缓冲液冲洗干净。
   10.4 流速突然变大或变小会导致柱压的突然改变,时间久了柱子填料会坍陷或松动,最终柱压下降,所以泵开始和结束前要注意缓慢改变流速。
   10.5 流动相使用前必须进行脱气处理,可用超声波震荡10~15min。
   10.6 不要在系统中长期留存100%乙腈。
   10.7 在没有色谱柱流动相流动的情况下,不要使柱温箱长时间保持高温。

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