仪器设备展播
平行生物反应系统
发表时间:2013-12-09 阅读次数:1785次
1.仪器描述
   仪器摆放位置:生物药学楼6#-207
   固定资产编号:201350342
   厂商、型号: Eppendorf公司 ,DS1500ODSS
   规格参数:工作体积:400-1600 mL
   转速驱动:顶端驱动,转速30-500 rpm
   搅拌桨: 3个
   传感器尺寸:320 mm
   侧臂:2*GL45
   附件及存放位置: 生物药学楼6#-207
   负责人及联系方式:张宝红 34204631
 
2.安装系统
    连接生物反应器的所有气体、电极和冷凝水,注意检查所有阀门的状态,检查pH电极和溶氧电极。pH电极一直保存在饱和KCl溶液中,使用时蒸馏水冲洗后安装使用,注意电极顶端的保护,切勿碰撞或摩擦。溶氧电极使用前检查溶氧膜的完整性,及时补充电解液。冷凝水装置要定期清洗,加入去离子水,并定期检查水位,水的质量容易造成冷凝系统的进出口小孔筛的阻塞。
 
3.开机
    打开电脑、每个控制器、气体管道、空气压缩机、冷凝水系统、冷凝装置, 登陆电脑,登陆控制软     件。
 
4.创建工作流程
    4.1   创建一个新的工作流程;
    4.2   根据实验需要,选择控制参数;
    4.3   设定使用的反应器数量1-4个;
    4.4   选择工作流程的准备工作:pH校准(必选)、补料泵校准;DO校准(必选);清洗程序。
    4.5   选择要运转的反应器,状态设为free;
    4.6   设定工艺参数:DO、pH、N、Gasflow、T等参数。
 
5.pH校准
   两点校准模式:
   A. 第一点校准
(1)准备pH标准液:pH4.0和pH7.0
(2)运行pH校准,点击“run” 按键,输入校准的pH;
(3)将pH点击浸入pH7.的标准液中;
(4)将温度补偿探头浸入相应的pH电极标准液;
(5)读数稳定以后,按键“Calibrate Offset”,开始第一点的校准;
(6)校准按键显示黄色圈,表示正在进行校准;显示绿色圈表示校准完成;
 
   B. 第二点校准
(7)将pH电极取出,润洗后浸入第二个pH标准液中(pH4.0);同时将温度补偿探头也浸入相应的电极标准液中;
(8)读数稳定以后,按键“Calibrate Slope”开始第二点的校准;
(9)校准按键显示黄色圈,表示正在进行校准;显示绿色圈表示校准完成;
 
   C. 再次校准
(10)将电极和温度补偿探头润洗后转入pH7.0电极标准液;
(11)读数稳定以后,比较第一点校准的第一次读数,误差在0.02pH范围内;
(12)将电极和温度补偿探头润洗后转入pH4.0电极标准液;
(13)读数稳定以后,比较第二点校准的第一次读数,误差在0.02pH范围内;
(14)按键“Stop”,完成pH校准;
(15)再次校准的误差超过范围,需要重新进行校准。
 
6.补料泵校准
    补料培养方式选用
 
7.灭菌
    7.1   将电极安装好,反应器内装入适量的PBS缓冲液;
    7.2   将所有元件用灭菌纸和锡纸包好;
    7.3   灭菌。
 
8.溶氧电极校准
    8.1   灭菌后连接所有装置,接通溶氧电极电源,极化6小时以上;
    8.2   通入空气,使溶液处于空气饱和状态;
    8.3   在“Std Slp”下方输入实际值,通常为100%;
    8.4   打开电脑控制面板的控制开关,参数设定尽量和实验参数一致;
    8.5   等到所有的PV读数稳定以后,按键“Calibrate Slpoe”;
    8.6   校准按键显示黄色圈,表示正在进行校准;显示绿色圈表示校准完成;
    8.7   零点校准,断开电源,读数显示为“0”;
    8.8   接通溶氧电极电源,读数稳定后与第一次读数误差在2%以内即可;
    8.9   按键“Stop”,校准完成。
 
9.细胞接种
    细胞接种在生物安全柜中独立完成,按照实验设计的接种密度,每个反应器去连接以后移至生物安全柜,单独接种,尽快完成,减少溶氧电极断电时间,如果溶氧电极断电30 min以上,需重新极化。接种完成后马上连接所有通路,开始运行程序。
 
10.程序运行、生物反应器培养
    10.1  打开Main Process View界面的所有控制开关;
    10.2  分别打开每个运行的生物反应器控制界面的所有开关;
    10.3  程序进入正常运行状态,细胞培养开始。
 
11.在线取样
    11.1  准备好取样注射器;
    11.2  酒精消毒取样口;
    11.3  旋开取样口,放好取样帽,将注射器旋入取样口;
    11.4  打开取样阀门,吸取1-2 mL,丢弃,以排掉取样管中存留样品;
    11.5  再次旋入注射器,按照实验设计的取样量取样;
    11.6  取样后,取样口酒精消毒,旋好取样帽,在线取样完成。
 
12.结束
    12.1  培养完成后,将鼠标移至电脑控制面板左侧运行程序,点击右键,点击“Finish”,培养结束。可以选择每个反应器单独停止,也可以整个运行系统同时停止,根据实验情况而定;
    12.2  关闭冷凝水开关,断开冷凝水进出水,注意冷凝管内的水会流出;
    12.3  断开其他所有元件,及时将pH电极和溶氧电极盖好帽子;
    12.4  断开补料瓶接口;
    12.5  将反应器移出,收集培养液;
    12.6  准备清洗反应器。
 
13.清洗
    13.1  补料管清洗,根据补料物选择清洗试剂,一般情况下可用去离子水清洗;
    13.2  清洗后排空,备用;
    13.3  pH电极清洗,注意顶端保护,清洗后马上保存在KCl饱和溶液中;
    13.4  分别清洗溶氧电极、取样管、通气管和罐体;
    13.5  将所有元件晾干备用;

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